Caracterización fenotípica y proteómica (MALDI-TOF MS) de bacilos Gram negativos multireesistentes aislados en un Hospital Universitario Chileno

Abstract

En la última década se ha observado un incremento en el número de bacilos Gram negativos multirresistente hospitalarios productores de ß-lactamasas de tipo BLEE y Carbapenemasas que son codificadas en elementos genéticos móviles. Por lo anterior la premura de tener resultados se ha convertido en un desafío para los laboratorios de microbiología clínica. La espectrometría de masas MALDI-TOF es una herramienta que ha revolucionado el diagnóstico microbiológico. La gran especificidad de los espectros obtenidos, la rapidez con que se obtienen resultados y su relativamente bajo costo por muestra analizada han hecho de MALDI-TOF la técnica preferida para realizar estudios de comparación de poblaciones y la identificación de clones epidemiológicos.

Esta investigación fue un estudio experimental-retrospectivo no intervencional, que se realizó en el laboratorio de Microbiología del Hospital Clínico de la Universidad de Chile. Se recolectaron 193 cepas de Enterobacterales y Bacilos Gram negativos no fermentadores multirresistente aislados de pacientes, desde octubre 2018 hasta marzo 2019. Estas cepas se caracterizaron por su susceptibilidad a diferentes antimicrobianos por sistema Vitek, mecanismos de resistencia por CIM, colorimetría, inmunocromatografía y espectrometría de masas. Finalmente, sus relaciones clonales se analizaron por espectrometría de masas y electroforesis de campo pulsado.

La distribución de cepas con un perfil de multirresistencia, con resistencia a por lo menos 3 familias de antimicrobianos, fue: Klebsiella pneumoniae 64 (33.2%), Escherichia coli 57 (29.5%), Pseudomonas aeruginosa 33 (17.1%), Enterobacter hormaechei 9 (4.7%), Enterobacter cloacae 8 (4.2%), Klebsiella oxytoca 8 (4.2%), Proteus mirabilis 6 (3.1%), Enterobacter aerogenes 3 (1,5%) Morganella morganii 2 (1.0%), Proteus vulgaris 2 (1.0%), Raoultella planticola. 1 (0.5%). La determinación de BLEE y Carbapenemasas por sistema MALDI-TOF MS tuvo un 100 y 93% de sensibilidad respectivamente, la biotipificación proteómica no indicó brotes clonales de Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae y Pseudomonas aeruginosa y al comparar con electroforesis de campo pulsado no se encontró una relación de homogeneidad.

Los resultados obtenidos en este estudio nos permiten concluir que la metodología MALDITOF MS realizada en equipo VITEK® MS detecta de forma efectiva las BLEE y carbapenemasas, además permite realizar dendrogramas proteómicos para estudios epidemiológicos en tiempo real con el potencial de convertirse en una herramienta comparable con electroforesis de campo pulsado. Finalmente, la tecnología MALDI-TOF MS ha comprobado ser una metodología de fácil implementación que permite una rápida identificación de microorganismos con resultados dentro de 24 horas posteriores al primer aislamiento de bacterias posiblemente de origen clonal, para así tener un control rápido y oportuno ante un brote infeccioso.