Estudio de las propiedades analíticas de los métodos inmunoquímicos aplicados a la determinación de sulfonamidas en Mieles.

Abstract

La presencia de contaminantes en alimentos constituye un riesgo para la salud de los consumidores, pudiendo producir toxicidad aguda o crónica, efectos mutagénicos y carcinogénicos, desórdenes en el desarrollo corporal, reacciones alérgicas y fenómenos de resistencia bacteriana, entre otros. Uno de los grupos de contaminantes que más preocupa es el de las sustancias con actividad farmacológica, entre los que encontramos a los antibióticos.

En apicultura, el uso de antibióticos se ha generalizado para el tratamiento de enfermedades como la Loque Americana y Loque Europea, que afectan principalmente a la cría de la abeja, lo que provoca la aparición de residuos de estos contaminantes en la miel. La presencia de residuos de antibióticos en los productos de la colmena deriva habitualmente de una mala praxis del apicultor, siendo un problema global de solución difícil, con graves repercusiones para la salud de los seres vivos terrestres y acuáticos que generan desequilibrios en los compartimentos ambientales, lo que ha dado lugar a la aparición de trabas al comercio de miel y pérdida de confianza del consumidor.

En base a todo lo expuesto anteriormente, el principal objetivo de esta Tesis doctoral ha sido la evaluación de las propiedades analíticas de los métodos inmunoquímicos, aplicados a la determinación de sulfonamidas en mieles, con el fin de diseñar una estrategia de análisis aplicable in situ y en laboratorio, que permita procesar un elevado número de muestras de forma rápida, garantizando la seguridad de la miel que entra al mercado alimentario.

En primer lugar se desarrolló y validó un método de cromatografía líquida acoplada a espectrometría de masas, que permita detectar y confirmar de forma inequívoca, la presencia de nueve sulfonamidas en muestras de miel. Optimizado el protocolo de extracción se procedió a validar el método cromatográfico, determinando los parámetros que establece la Decisión de la Comisión 2002/657/EC: selectividad y especificidad, límite de decisión (CCα) y límite de detección (CCβ), robustez y linealidad, con la finalidad de poder ser usado como método de referencia y confirmación.

En segundo lugar, la investigación se centró en la puesta a punto de dos tipos de sistemas inmunoanalíticos. Por un lado, se han desarrollado tres ELISAs en formato placa para ensayos en laboratorio, dos específicos para sulfatiazol, y otro genérico capaz de detectar seis sulfonamidas. Por otro lado, para agilizar y reducir el tiempo de análisis, se desarrolló una herramienta analítica (inmunoensayo en flujo lateral) a utilizar como criterio de compra de miel bruta aplicable in situ, con un cut off muy inferior a los niveles recomendados para residuos de sulfonamidas en miel.

Para cada metodología de análisis se realizó un estudio minucioso de la metodología experimental, con la finalidad de optimizar las condiciones de trabajo. Se prestó especial atención al tratamiento de la muestra, ya que dada la complejidad de la matriz objeto de estudio, se requiere una hidrólisis previa para recuperar la mayor cantidad de residuos de sulfonamidas.

Los inmunoensayos desarrollados se aplicaron a la determinación de residuos de sulfonamidas en miel, obteniendo buena correlación con la metodología de referencia, apoyando así su incorporación como métodos de cribado, a los Planes de Vigilancia y Control de Residuos, reduciendo tiempo y costes de ensayo.